影响PCR扩增结果的因素
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1、引物:引物到用户手头前都是以干粉形式存在的,干粉很容易丢掉,引物溶解后可以测定一下OD,将所有引物的浓度调整到一致,对实验有一定帮助。
2、高温聚合酶:高温聚合酶是非常稳定的,除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶扩增是有差异的,活性定量和标示未必相同。选用表现一贯稳定的酶,而不是最便宜的。
3、缓冲液:缓冲液一般不容易出问题,只是使用前需要彻底融化混匀使用。
4、温度:变性和退火温度是主要需要考虑的。
5、模板:PCR 的关键之一,模板不是越多越好。
6、dNTP: dNTP是PCR扩增体系中最不稳定的,反复冻融会使dNTP发生降解。
7、Mg2+:是TAQ活性所必须的,浓度过高过低对反应都有比较大的影响。过低,合成效率会下降,过高,非特异性会加大。
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